Ohutkerroskromatografia on kemiallinen analyysimenetelmä, joka perustuu 0,1 - 0,5 mm paksun sorbenttikerroksen käyttöön kiinteänä faasina. TLC-menetelmää voidaan käyttää useilla aloilla, ja se mahdollistaa monenlaisten kemiallisten yhdisteiden määrittämisen.
Menetelmän periaate
Ohutkerroskromatografiamenetelmä syntyi paperikromatografiasta ja ensimmäiset kokeet suoritettiin 1800-luvun 80-luvulla. Tämän analyysin aktiivinen käyttö alkoi vasta vuoden 1938 jälkeen.
TLC-tekniikka sisältää liikkuvan faasin (eluentti), paikallaan olevan faasin (sorbentti) ja analyytin. Kiinteä vaihe asetetaan ja kiinnitetään erityiselle levylle. Levy voidaan valmistaa lasista, alumiinista tai muovista - nämä ovat uudelleenkäytettäviä substraatteja, jotka on pestävä, kuivattava ja valmisteltava sorbentin levittämiseksi jokaisen käytön jälkeen. On myös mahdollista käyttää paperilevyjä, jotka hävitetään käytön jälkeen.
Silikageeliä käytetään useimmiten kiinteänä faasina, mutta on mahdollista käyttää muita sorbentteja, esimerkiksi alumiinioksidia. Tätä tai toista sorbenttia käytettäessä tekniikkaa on noudatettava tarkasti, jotta tulos olisi tarkka esimerkiksi siksi, että silikageeli voi antaa virheellisen tuloksen, jos laboratoriossa on liian kosteaa ilmaa.
Liikkuvia aineita käytetään liikkuvana faasina, esimerkiksi vettä, etikkahappoa, etanolia, asetonia, bentseeniä. Liuotin on valittava vastuullisesti, koska kromatografian tulos riippuu suoraan sen ominaisuuksista (viskositeetti, tiheys, puhtaus). Kutakin analysoitua näytettä varten valitaan yksittäinen liuotin.
Analyysi
Näyte on laimennettava liuottimeen. Jos täydellistä liukenemista ei tapahdu ja liian paljon epäpuhtauksia on jäljellä, näyte voidaan puhdistaa uuttamalla.
Näytteen levitys levylle voidaan tehdä automaattisesti tai manuaalisesti. Automaattinen levitys käyttää mikrosumutusmenetelmää, jossa kukin näyte ruiskutetaan substraatin sopivalle alueelle. Manuaaliseen käyttöön käytetään mikropipettiä. Kynsimerkit asetetaan levylle kutakin näytettä varten. Jokainen näyte levitetään kapillaarilla levylle yhdessä linjassa riittävällä etäisyydellä merkkeistä, jotta se ei reagoi lyijyn hiilen kanssa.
Levy asetetaan astiaan, jonka pohjaan eluentti kaadetaan. Tuki asetetaan yhdellä reunalla astiaan merkittyyn viivaan asti. Astia on tiiviisti suljettu liikkuvan faasin haihtumisen välttämiseksi. Kapillaarivoimien vaikutuksesta eluentti alkaa nousta sorbenttikerrosta ylöspäin. Kun eluentti saavuttaa tietyn tason, levy poistetaan astiasta ja kuivataan.
Jos halutulla aineella ei ole väriä, se ei ole näkyvissä alustalla. Siksi visualisointi suoritetaan - levyn käsittely jodihöyryllä tai muilla väriaineilla.
Tällaisen käsittelyn jälkeen tulos arvioidaan. Sorbentissa esiintyy vaihtelevia värillisiä alueita. Aineen (tai aineryhmän) määrittämiseksi värillisiä alueita, niiden kokoa, voimakkuutta ja liikkuvuutta verrataan vertailunäytteeseen.
TLC-menetelmää käytetään laajalti, koska se on nopea, halpa, tarkka, intuitiivinen, ei vaadi monimutkaisia laitteita ja on helppo tulkita.